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蛋白質免疫印跡(Western Blot)

發布時間:2021/09/24
蛋白質免疫印跡(Western Blot)

  實驗介紹蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即western blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。

 

  Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶的第二抗體起反應,經過底物顯色以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

 

  實驗的關鍵是如何正確的抽提獲得實驗所需目的蛋白,我們會根據不同目的蛋白、組織類型、蛋白類型制定出抽提方案來獲得高質量、含量足夠的目的蛋白的蛋白裂解液。

 

  免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(western blot),它是根據抗原抗體的特異性結合檢測樣品中蛋白的方法,并能對蛋白進行定性和半定量分析。

 

  質量控制:制定蛋白質抽提方案、嚴格的預實驗摸索優化實驗條件,確保實驗的可靠性。

 

  交付結果:數據分析、實驗報告、原始數據及圖片、剩余樣本等

 

  質量保證:客觀、公正、可信的實驗結果

 

  交付時間:大約10-15個工作日(根據預實驗、樣本數量情況決定)

 

  服務項目:總蛋白/細胞膜/漿/核/特定細胞器蛋白抽提、蛋白定量、Western Blot檢測

 

  服務流程1、接收樣本以及抗體,實驗室可以有償提供常備抗體。

 

  2、根據樣本類型、目的蛋白表達確定蛋白抽提方案,預實驗確定樣本中蛋白表達以及抗體效價。

 

  3、正式實驗。

 

  4、5-10個工作日內完成,根據檢測指標難易、蛋白表達豐度不同以及檢測指標數量多少相應變化。

 

  5、出具實驗報告(詳細實驗流程以及數據分析),提供原始掃描圖片。

 

  樣本要求可以接收樣本有:客戶自己提取蛋白樣本、細胞樣本、組織樣本、其他,樣本來源為人和大小鼠。

 

  1、客戶提供已經提取樣本

 

  1)、蛋白保存完好:蛋白提取后保存于-80℃或者液氮。

 

  2)、提取過程中加入合適蛋白酶抑制劑。

 

  3)、蛋白采用BCA法測濃度后,濃度范圍應該為2-8ug/ul或者更高。

 

  4)、經預實驗檢測合格后才可進行正式實驗。

 

  2、客戶提供細胞樣本

 

  1)、細胞狀態良好, 保證運輸到實驗室的細胞為活細胞。

 

  2)、每個實驗組細胞數量保證大于106以上,根據檢測指標難易、蛋白表達豐度不同以及檢測指標數量多少細胞要求數量會相應變化。

 

  3、客戶提供組織樣本

 

  1)、組織保存完好:保存于-80℃或者液氮。

 

  2)、組織重量要求大于100mg,根據組織大小、檢測指標難易、蛋白表達豐度不同以及檢測指標數量多少組織要求數量會相應變化。

 

  3)、組織中血液殘留少,應該剔除除目的組織以外的部分。

 

  4、其他

 

  1)、對于需要分離細胞組分蛋白,根據情況制定不同提取方案。

 

  2)、特殊樣本:血清、細胞培養上清、非實驗室常規來源樣本(狗、豬、猴等)等,根據具體情況制定不同實驗方案。

 

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